Розділи:
Нові технології
Определение специфического IgE к различным аллергенам
сторінки: 80-82
Широкая распространенность аллергических заболеваний (АЗ; более 30% населения планеты) превратили аллергию в глобальную медико-социальную проблему. Учитывая ежегодный рост аллергопатологии, регистрируемый повсеместно (каждый третий житель планеты страдает аллергическим ринитом и каждый десятый – бронхиальной астмой), можно говорить о пандемии аллергии, которая охватила большинство стран мира с конца прошлого века и продолжается до нашего времени. Как показали исследования последних 30 лет, распространенность АЗ в мире каждые 10 лет удваивается [1]. Наиболее реальной для Украины в настоящий период является частота АЗ в среднем у 30% населения в зависимости от экологии, климата, развития производства в определенных регионах [2].
Проведение эффективных лечебно-профилактических мероприятий у пациентов с АЗ должно осуществляться с учетом достоверной информации о том, на какие конкретно аллергены отмечается сенсибилизация у больного [3]. В связи с этим особую актуальность приобретает достоверная специфическая диагностика аллергии с определением причинных аллергенов в каждом конкретном случае. Широко распространенные на сегодняшний день методы специфической аллергодиагностики in vivo имеют ряд противопоказаний.
В то же время, международными консенсусами определено, что диагностика пищевой аллергии должна базироваться на выявлении специфических IgE-антител [4, 5]. Следует указать, что в Украине до настоящего времени не производились тест-системы для специфической аллергодиагностики. Импортные тест-системы характеризуются очень высокой стоимостью, перечень аллергенов для диагностики в импортных тест-системах не содержит ряд распространенных в Украине продуктов, бытовых антигенов и др.
Целью исследования была разработка первой отечественной иммуноферментной тест-системы для определения в сыворотке концентрации специфического IgE к продуктам питания, бытовым аллергенам.
При разработке иммуноферментных тест-систем ставились следующие задачи:
• диагностика клинически значимого количественного содержания специфического IgE, а не только выявление сенсибилизации;
• возможность постоянного контроля эффективности противоаллергических мер, а также ранней диагностики возможных осложнений и/или рецидивов заболевания;
• использование для анализа небольшого объема крови (до 2-3 мл при выполнении 20-30 анализов);
• высокая специфичность и чувствительность анализа;
• простота и быстрота выполнения методики (3-4 ч);
• безопасность для обследуемого.
Материалы и методы исследования
В качестве объекта сравнения использовали сыворотки 14 пациентов с пищевой аллергией. В анамнезе у всех из них наблюдали неоднократные аллергические реакции на молоко коровье и яйцо куриное.
Определение уровня специфических антител класса Е к ряду аллергенов (в том числе и вышеуказанным продуктам) в сыворотке обследованных проводилось с помощью разработанной специалистами Донецкого национального медицинского университета имени М. Горького первой отечественной тест-системы «Специфический IgЕ». В качестве сравнения использовалась иммуноферментная тест-система производства RADIM (Италия). Характеристика иммуноферментной тест-системы, созданной в Украине, представлена в табл. 1. В набор включена калибровочная кривая, позволяющая определять содержание специфического IgE в МЕ/мл. Оптическая плотность образцов подсчитывалась с помощью ИФА анализатора А-CK01 на базе сканера Scanjet G4050 фирмы Hewlett-Packard, разработанного специалистами Донецкого национального медицинского университета имени М. Горького и ООО «Укрмед-Дон».
|
Параметры |
Характеристика |
|
Принцип метода |
Твердофазный ИФА |
|
Общая продолжительность анализа |
3 ч 30 мин |
|
Диапазон измерений, МЕ/мл |
0-100 |
|
Оптическая плотность диапазона |
0,04-3,50 |
|
Чувствительность, МЕ/мл |
0,1 |
|
Коэффициент вариации |
не >5% |
|
Объем сыворотки для исследования в дублях |
100 мкл |
Результаты исследования и их обсуждение
Установлено, что разработанная тест-система характеризуется линейностью калибровочной кривой, высокой чувствительностью (0,1 МЕ/мл) и широким диапазоном оптической плотности кривой и исследуемых образцов (оптическая плотность стандарта 100 МЕ/мл достигает 6,000 ед. и выше), что обусловливает продление срока ее эксплуатации до 4-5 лет с сохранением экстинции верхней точки не ниже 2 ед.
В настоящее время с помощью тест-системы возможно определение уровня специфического IgE к 130 аллергенам. Среди них широко представлены мясо-молочные и морепродукты (табл. 2), а также овощи и фрукты (табл. 3). Следует особо подчеркнуть, что в перечень аллергенов, на которые возможно выявление сенсибилизации с помощью предлагаемой системы, включен ряд молочных продуктов, более характерных для употребления в Украине (творог, брынза, кефир, ряженка). Также широко представлена рыба, речные и морепродукты, в том числе толстолобик, пеленгас, анчоус, килька, речной рак. Кроме того, в отношении некоторых овощей и фруктов (капуста, смородина, черешня, яблоки, виноград) предусмотрено определение аллергии на их отдельные сорта, распространенные на территории Украины.
|
Молочные продукты |
Мясо |
Рыба и морепродукты |
|
Йогурт Кефир Сыр Брынза Творог Козье молоко Коровье молоко Казеин молока |
Говядина Кролик Свинина Курица Индейка Гусь Утка Яйцо (желток) Яйцо (белок) |
Карп Сельдь Скумбрия Минтай Икра красная Семга Кета Толстолобик Хек Щука Пеленгас Бычок Судак Анчоус Килька Кальмар Креветки Рак |
|
Овощи |
Фрукты и ягоды |
|
Тыква Кабачок Огурец Перец сладкий Соя Картофель Морковь Капуста белокачанная Капуста вареная Капуста брюссельская Капуста брокколи Сельдерей Фасоль Томат Репчатый лук Цукини Свекла Петрушка Укроп Салат зеленый Чеснок |
Банан Яблоко Яблоко «Антоновка» Яблоко «Джонатан» Яблоко «Семеренко» Груша Киви Крыжовник Лимон Апельсин Грейпфрут Хурма Абрикос Черешня Персик Малина Клубника Виноград белый Виноград красный Черешня желтая Черешня розовая Черешня красная Смородина черная Смородина красная Смородина белая Слива Манго Шиповник Финики Гранат Оливки |
Сравнение разработанных иммуноферментных тест-систем с результатами, полученными при использовании наборов производства RADIM, показало, что наши тест-системы имеют высокую чувствительность анализа – 0,1 МЕ/мл. В то же время импортные тест-системы способны диагностировать специфические IgE на уровне 30 МЕ/мл и выше. Концентрации специфических IgE на различные аллергены, составляющие от 0,35 до 30 МЕ/мл, данными импортными системами не выявлялись. Вместе с тем, по данным ряда авторов, уровень специфических IgE-антител, на 95% предсказывающий вероятность развития клинической реакции при употреблении в пищу распространенных продуктов питания (в том числе молока коровьего, яиц, орехов, рыбы, пшеницы), составляет от 7 МЕ/мл [5], а для детей – 1,5-3,0 МЕ/мл и ниже [6].
Таким образом, впервые в Украине разработана иммуноферментная тест-система, отличающаяся высокой чувствительностью, характеризующаяся линейной калибровочной кривой и длительным сроком эксплуатации. В перечень аллергенов, на которые возможно выявление сенсибилизации с помощью предлагаемой системы, включен ряд продуктов, более характерных для употребления в Украине. Сравнение результатов, полученных с помощью разработанной тест-системы, с результатами использования набора импортного производства показало более высокую выявляемость низких диагностических уровней специфического IgE с помощью тест-системы, разработанной специалистами Донецкого национального медицинского университета имени М. Горького, ООО «Укрмед-Дон».
Выводы
1. Разработана первая отечественная иммуноферментная тест-система IV поколения для определения аллерген-специфического IgE.
2. Разработанная тест-система имеет высокую чувствительность (0,1 МЕ/мл) и позволяет выявлять низкие диагностические концентрации исследуемого маркера (от 0,35 до 100 МЕ/мл), что не всегда удается при использовании импортных аналогов.
3. Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности использования разработанной тест-системы для специфической аллергодиагностики в Украине.
Литература
1. Лусс Л.В. Этиология, патогенез, проблемы диагностики и лечения аллергического ринита / Л.В. Лусс // Рус. мед. журн. — 2003. — Т. 11, № 12. — С. 718-729.
2. Пухлик Б. Аллергия государственного масштаба // Еженедельник 2000. — 2007. – № 8 (355). — С. 2.
3. Garcia-Ara M.C. Cow’s milk-specific immunoglobulin E levels as predictors of clinical reactivity in the follow-up of the cow’s milk allergy infants / M.C. Garcia-Ara, M.T. Boyano-Martinez, J.M. Diaz-Pena [et al.] // Clin Exp Allergy. – 2004. – Vol. 34. – P. 866–870.
4. Bindels J.G. Allergens: latest developments, newest techniques / J.G. Bindels, M. Hoijer // Bull Int Dairy Fed. – 2000. – Vol. 351. – P. 31–32.
5. Sampson H.A. Food allergy / H.A. Sampson // Journal of Allergy and Clinical Immunology. — 2003. — Vol. 111, № 2. — P. 540-547.
6. Osterballe M. Threshold levels in food challenge and specific IgE in patients with egg allergy: is there a relationship? / M. Osterballe, C. Bindslev-Jensen // J Allergy Clin Immunol. — 2003. — № 112. — P. 196-201.
